ПЦР в режиме реального времени, его применение и его преимущества в области лесной генетики

Специалисты отдела мониторинга состояния лесных генетических ресурсов приступили к освоению метода ПЦР в режиме реального времени (Real-time PCR). Это лабораторный метод, основанный на полимеразной цепной реакции (умножение количества фрагментов ДНК), который используется для одновременной амплификации и измерения количества исследуемой молекулы ДНК. Метод Real-time PCR позволяет тратить минимальное количество времени на исследование, увеличивая количество анализов, при этом высока точность результата, но, к сожалению, он годен лишь для измерения количественных характеристик. Для качественного анализа проб по-прежнему используется детекция результата с помощью метода электрофореза.

В тестовом режиме провели ПЦР в реальном времени с ДНК семян лиственницы даурской и ДНК хвои кедра. Всего выполнили 20 анализов. Получили количественный результат, который будет служить для оценки и определения дальнейших исследований.  Определили содержание ДНК в образце без применения оценки с помощью спектрофотометра, определили шкалу распределения образцов в 3 разных популяциях и получили достоверные результаты качества нуклеиновой кислоты в каждом образце. Желательно применять данный метод в совокупности с методом электрофореза для более комплексной оценки полученных результатов.  

Таким образом, для отслеживания мониторинга состояния лесных генетических ресурсов, при освоении метода ПЦР в реальном времени и при использовании двух методов одновременно, появляется возможность более полной и точной интерпретации оценки генетического состояния популяций основных лесообразующих пород. В результате можно оценить не только такие качественные показатели, как длину участка ДНК, гомо- или гетерозиготность, полиморфизм, но и определить количество ДНК в пробе для определения возможности дальнейшей работы с ней. При работе с фитопатогенами генетическим методом, появляется возможность не просто определить наличие либо отсутствие патогена, но и выяснить его количество в исследуемом материале, и, следовательно, помимо родового и видового описания, оценить степень зараженности.